臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試生物化學知識點精講
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3.dna變性及其應用
3.1.dna變性和復性的概念
在極端的ph值(加酸或堿)和受熱條件下,dna分子中雙鏈間的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構解開,這就是dna的變性。變性后的dna在260nm的紫外光吸收增強,稱為高色效應。在dna變性中以dna的熱變性意義最大。dna的熱變性又稱dna的解鏈或融解作用。在dna熱變性過程中,使紫外吸收達到最大增值50%時的溫度稱為解鏈溫度,又稱融解溫度tm。tm與dna分子g+c量有關。
熱變性的dna溶液經(jīng)緩慢冷卻,兩條解鏈的互補單鏈重新締合,恢復雙螺旋結(jié)構,即退火。變性dna經(jīng)退火恢復原狀的過程稱變性dna的復性。伴隨復性,dna溶液紫外吸收減弱,稱減色效應。
3.2.核酸雜交
復性是指核酸雙鏈分子中分開的兩股單鏈重新結(jié)合。復性可以發(fā)生在具有堿基配對的不同來源的核酸鏈之間,形成雜化雙鏈,這一過程稱為核酸雜交,生成的雙鏈稱為雜化雙鏈。核酸雜交技術(例:核酸探針)是目前研究核酸結(jié)構、功能常用的手段之一。
4.rna結(jié)構與功能
rna與dna不同,它通常以數(shù)十個至數(shù)千個核苷酸組成的單鏈形式存在,但也可以有局部的二級結(jié)構或三級結(jié)構。它比dna分子小,它的功能多樣,種類較多,主要有信使rna(mrna)、轉(zhuǎn)運rna(trna)、核糖體rna(rrna)三類。
4.1. 信使rna(mrna):
mrna為線狀單鏈結(jié)構。可作為蛋白質(zhì)合成的模板。
真核生物:①mrna在5’-端含倒裝的7-甲基三磷酸鳥苷(m7gppp),稱為帽子結(jié)構(可避免核酸酶的降解)。②mrna的3’-末端有一段長短不一的多聚腺苷酸polya序列,由數(shù)十個至上百個腺苷酸連接而成。3’-末端的多聚腺苷酸結(jié)構可增加轉(zhuǎn)錄活性,增加mrna穩(wěn)定性。③5’加“帽”、3’加“尾”屬轉(zhuǎn)錄后加工過程。④分子中有修飾堿基并有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。
原核生物:①mrna往往是多順反子②無帽子結(jié)構無多聚a尾巴③無修飾堿基。
分子中的每3個核苷酸為一組,決定肽鏈上一個氨基酸,稱為遺傳密碼。其特點:①三個相連核苷酸組成一個密碼子,編碼一個氨基酸,共有64個密碼子。②密碼子之間無核苷酸間隔。③一種氨基酸可有多種密碼子。④所有生物使用同一套密碼子。
4.2.轉(zhuǎn)運rna(trna):
70至90個核苷酸構成。分子中含有稀有堿基,包括雙氧尿嘧啶、假尿嘧啶和甲基化的嘌呤。
①trna的作用是攜帶相應的氨基酸將其轉(zhuǎn)運到核蛋白體上以供蛋白質(zhì)合成。
②trna的二級結(jié)構呈三葉草樣。
③trna的三級結(jié)構呈倒l形。
4.3.核蛋白體rna(rrna):
細胞內(nèi)含量最多的rna,約占rna總量的80%以上。rrna與核糖體蛋白共同構成核糖體。rrna由大亞基和小亞基組成。真核生物的核糖體小亞基由18srrna和30多種核糖體蛋白構成,大亞基則由5s、5.8s及28s三種rrna與50種核糖體蛋白組成。當大小亞基聚合時,可作為蛋白質(zhì)合成的場所。
例題
下列關于核糖體的組成和功能的描述,正確的是
a.只有rrna b.有轉(zhuǎn)運氨基酸的作用
c.由trna和蛋白質(zhì)組成d.遺傳密碼的攜帶者
e.蛋白質(zhì)的合成場所
解析:該題目屬于理解應用型,答案選擇e
知識點三:酶
1.酶的催化作用(重要考點)
1.1.酶的分子結(jié)構與催化作用
酶是由活細胞產(chǎn)生,能在體內(nèi)外對其底物起催化作用的一類蛋白質(zhì)。
體內(nèi)多數(shù)酶類屬于結(jié)合蛋白質(zhì)的酶類,分為兩部分,蛋白質(zhì)部分稱為酶蛋白(決定酶反應特異性),非蛋白質(zhì)部分稱輔助因子(參與酶蛋白的催化反應)據(jù)結(jié)合強弱分為輔基和輔酶。
酶分子中與酶活性有關的化學基團稱為必須基團,而必須基團在空間位置上相對集中形成的特定空間結(jié)構區(qū)域,是酶發(fā)揮催化作用的關鍵部位,稱為酶的活性中心。
例題
酶促反應中決定酶專一性的部位是
a.酶蛋白 b.輔基或輔酶
c.金屬離子 d.催化基因
e.底物
解析:該題目屬于識記型,答案選擇a
1.2.酶促反應的特點(高效性、專一性、不穩(wěn)定性、可調(diào)控性)
酶是一類生物催化劑,遵循一般催化劑的基本規(guī)律(例:反應前后質(zhì)量不變,只能加速而不能改變反應)。由于酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì),因而具有一些獨特的催化性質(zhì):①酶能顯著地降低反應活化能,具有極高的催化效率。②每種酶都選擇性地催化一種或一類化合物,具有高度的特異性;③酶是蛋白質(zhì),其空間結(jié)構可受到各種理化因素的影響以致改變酶的催化活性,所以酶具有高度的不穩(wěn)定性;④酶促反應受多種因素調(diào)控以適應機體對不斷變化的內(nèi)外環(huán)境和生命活動的需要。
1.3.酶-底物復合物
酶在發(fā)揮催化作用前,需與底物密切結(jié)合。這種結(jié)合是酶與底物結(jié)構的相互誘導、相互形變、相互適應的過程(誘導契合學說),從而形成酶-底物復合物。
2.輔酶與酶輔助因子
除了單純由氨基酸殘基形成的單純蛋白質(zhì)作為酶以外,更多的酶需要輔助因子參與作用,通常被稱為結(jié)合酶,其中酶的蛋白質(zhì)部分稱為酶蛋白。根據(jù)輔助因子與酶蛋白結(jié)合成全酶的牢固程度,又分為輔酶和輔基兩類。輔酶為結(jié)構復雜的小分子有機物,通過非共價鍵與酶蛋白疏松結(jié)合,可用透析、超濾等方法而分離;輔基則常以共價鍵與酶蛋白牢固結(jié)合,不易與酶蛋白分離。除了上述輔酶外,酶輔助因子主要是各種金屬離子,如zn2+、fe2+、cu2+、mn2+、ca2+、mg2+、na2+和k+等。
表1-2 酶蛋白與輔酶因子
酶蛋白
輔助因子
物質(zhì)成分
蛋白質(zhì)
非蛋白質(zhì)
結(jié)合特點
一種酶蛋白只能結(jié)合一種輔助因子形成全酶
一種輔助因子可與不同的酶蛋白結(jié)合形成不同的全酶
參與反應
催化一定的化學反應
催化不同的化學反應
特性
決定反應的特異性
決定反應的種類和性質(zhì)
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